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登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測(cè)試劑盒

簡(jiǎn)要描述:

登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測(cè)試劑盒
Panbio Dengue IgG Capture ELISA
產(chǎn)品目錄號(hào)01PE10
預(yù)期用途
Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于推斷性定性檢測(cè)登革熱病毒(1-4血清型)繼發(fā)性感染患者的IgG抗體升高,輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)登革熱病毒感染臨床癥狀的患者,而且應(yīng)該與Panbio Dengue IgM Capture ELIS

更新時(shí)間:2025-01-03

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登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測(cè)試劑盒

Panbio Dengue IgG Capture ELISA

產(chǎn)品目錄號(hào)01PE10

預(yù)期用途

Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于推斷性定性檢測(cè)登革熱病毒(1-4血清型)繼發(fā)性感染患者的IgG抗體升高,輔助臨床實(shí)驗(yàn)室診斷出現(xiàn)登革熱病毒感染臨床癥狀的患者,而且應(yīng)該與Panbio Dengue IgM Capture ELISA 和Dengue Early ELISA聯(lián)用。Dengue Early ELISA也可檢測(cè)原發(fā)性登革熱病毒感染。Panbio Dengue IgG Capture ELISA早可在疾病發(fā)作后3天檢測(cè)到提示繼發(fā)性登革熱感染的高IgG, 水平。然而,準(zhǔn)確診斷繼發(fā)性感染的峰值檢測(cè)窗口是在疾病發(fā)作后6-15天。陽性結(jié)果是推斷出來的,必須經(jīng)過病毒分離培養(yǎng)、配對(duì)血清分析、免疫組織化學(xué)抗原檢測(cè)或病毒核酸檢測(cè)來確認(rèn)登革熱病毒感染。

 

概述

登革熱病毒是黃病毒屬,主要分布于熱帶和亞熱帶地區(qū)。世界上一半以上的人口居住于具有登革熱潛在傳播風(fēng)險(xiǎn)的地區(qū),登革熱是導(dǎo)致人類發(fā)病和死亡嚴(yán)峻的蟲媒病毒疾病1。登革熱病毒有4種不同但抗原相關(guān)的血清型,通過雌蚊主要是埃及伊蚊、白紋伊蚊傳播和波利尼西亞斑蚊傳播。

 

登革熱病毒感染的臨床表現(xiàn)各不相同,從亞臨床表現(xiàn)到致命。依據(jù)嚴(yán)重程度,該疾病被分為以下等級(jí):非特異性發(fā)熱疾病,典型登革熱,登革出血熱(DHF)(1級(jí)和2級(jí)),和登革休克綜合征(DSS)(3級(jí)和4級(jí))1。典型登革熱的特征是突然發(fā)熱并至少伴隨以下2種癥狀:頭痛,眼眶后疼痛,肌痛,關(guān)節(jié)痛,皮疹,出血表現(xiàn),和白血球減少癥2。雙相發(fā)熱病程常見失眠和厭食,失去味覺或口苦。DHF和DSS是嚴(yán)重的潛在致命性并發(fā)癥,通常與感染第二種血清型有關(guān)3。

 

在地方性流行登革熱感染的國家,大部分成年患者會(huì)出現(xiàn)繼發(fā)性登革熱感染4。利用ELISA方法檢測(cè)登革熱病毒的IgG抗體特異性升高是鑒別繼發(fā)性登革熱感染非常重要的診斷方法。繼發(fā)性感染患者并發(fā)癥的發(fā)生幾率較高5,6。傳統(tǒng)上,血凝抑制試驗(yàn)(HAI)滴度被用于劃分原發(fā)性或繼發(fā)性感染。當(dāng)前的界定方法是采用及時(shí)分離至少7天的配對(duì)血清標(biāo)本檢測(cè),急性標(biāo)本的HAI滴度> 1:1280被認(rèn)為患者感染了繼發(fā)性黃病毒7

 

Panbio Dengue IgG Capture ELISA是除HAI檢測(cè)之外另一種可對(duì)繼發(fā)性登革熱感染的血清學(xué)進(jìn)行診斷的方法。

如下所示,繼發(fā)性登革熱病毒感染的特征表現(xiàn)為高IgG ,水平,同時(shí)可能伴隨IgM水平升高8。Panbio Dengue IgG Capture ELISA用于檢測(cè)登革熱感染的IgG抗體水平相對(duì)于閾值特異性升高。該試驗(yàn)不用于檢測(cè)既往感染引起的低水平IgG抗體,這種情況通常見于地方性流行區(qū)的較多人群。因此,高IgG ,水平(> 22 Panbio單位)提示繼發(fā)性登革熱病毒感染。

 

檢測(cè)原理

血清中存在的登革熱病毒IgG抗體,與微孔測(cè)試條(測(cè)定板)上聚苯乙烯表面包被的抗人IgG抗體結(jié)合。用抗原稀釋劑將濃縮的重組登革熱1-4型抗原溶液稀釋到正確的工作容積。用昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)產(chǎn)生抗原,用特異性單克隆抗體純化抗原。在稀釋后的抗原中添加等體積的辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記單克隆抗體(MAb),形成抗原MAb復(fù)合物。清洗測(cè)定板上的剩余血清,將抗原MAb復(fù)合物添加到測(cè)定板中。然后這些抗原MAb復(fù)合物與血清登革熱特異性IgG抗體結(jié)合。在培養(yǎng)完成后清洗微孔,再添加無色的底物系統(tǒng) - 四甲基聯(lián)苯胺/過氧化氫(TMB顯色液)。底物被HRP(如存在)水解后,顯色液變藍(lán)。用酸終止反應(yīng)后,TMB變黃。顯色表示測(cè)試樣本中存在抗登革熱IgG抗體。

 

提供的材料

  • 抗人IgG包被微孔 - (測(cè)定板
    (12x8孔)。即用型。未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 登革熱1-4型抗原(重組) - 1瓶,無色瓶蓋,包含150μL(紅色)濃縮的1、2、3和4型登革熱病毒抗原。未使用的稀釋抗原必須丟棄。濃縮抗原在有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 清洗緩沖液(20倍) - 1瓶,60mL 20倍濃縮磷酸鹽緩沖鹽水(pH 7.2 – 7.6),含吐溫 20和防腐劑(0.1% Proclin™)。低溫可能結(jié)晶。若去除結(jié)晶在37孵育液體澄清?;旌暇鶆?。用19體積的蒸餾水稀釋1體積的清洗緩沖液。稀釋后的緩沖液可在2-25儲(chǔ)存一周。
  • 樣本稀釋劑 – 2瓶, 50 mL(粉色)。即用型。Tris緩沖生理鹽水(pH 7.2 – 7.6),含防腐劑(0.1% Proclin™)和添加劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 抗原稀釋劑 – 1瓶,50mL(無色)。即用型。磷酸鹽緩沖液,含防腐劑(0.1% Proclin™和0.005%慶大霉素)。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • HRP標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑 – 1瓶,7mL(綠色)。即用型。辣根過氧化物酶(HRP)標(biāo)記單克隆抗體示蹤劑,含防腐劑(0.1% Proclin™)和蛋白穩(wěn)定劑。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • TMB顯色液(TMB) - 1瓶,15mL。即用型。3,3’,5,5'-四甲基聯(lián)苯胺和過氧化氫的混合物,存放于枸櫞酸鹽緩沖液中(pH 3.5 – 3.8)。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 反應(yīng)控制品 – 1瓶,紅色瓶蓋,200μL人血清(含0.1%疊氮話鈉和0.005%硫酸慶大霉素)。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 校準(zhǔn)品 – 1瓶,黃色瓶蓋,850μL人血清(含0.1%疊氮和0.005%硫酸慶大霉素)。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 陰性質(zhì)控品 – 1瓶,綠色瓶蓋,200μL人血清(含0.1%疊氮和0.005%硫酸慶大霉素)。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-8可保持穩(wěn)定。
  • 終止液 – 1瓶,紅色瓶蓋,15mL。即用型。1M磷酸。有效期內(nèi)儲(chǔ)存于2-25可保持穩(wěn)定。

Proclin™ 300是Rohm 和Haas公司的注冊(cè)商標(biāo)。

 

需要但未提供的材料

  • 精確、可調(diào)節(jié)的微量移液器,含一次性吸液頭(5-1000 μL容積)
  • 去離子水
  • 標(biāo)板清洗系統(tǒng)
  • 酶標(biāo)儀,含450nm濾波器
  • 計(jì)時(shí)器
  • 刻度量筒
  • 燒瓶
  • 試管或微滴定板,用于稀釋血清

 

注意事項(xiàng)

用于體外診斷

  • 在制備質(zhì)控品的過程中使用的所有人源材料已經(jīng)過人類免疫缺陷病毒1/2(HIV 1 /2)抗體、丙肝(HCV)和乙肝表面抗原的檢測(cè),結(jié)果為陰性。但是,任何測(cè)試方法都不能*確信,且所有人源質(zhì)控品和抗原都應(yīng)按照潛在傳染性材料處理。疾病控制和預(yù)防中心以及美國國立衛(wèi)生研究院建議將潛傳染原按照生物安全二級(jí)處理。
  • 該測(cè)試只能使用血清執(zhí)行。尚未建立使用全血、血漿或其它標(biāo)本基質(zhì)的方法。
  • 不可使用黃疸或脂血癥血清,以及出現(xiàn)溶血或微生物生長(zhǎng)的血清。
  • 不可加熱,否則血清將失去活性
  • 在開始檢測(cè)前所有試劑必須平衡至室溫(20-25)。檢測(cè)受溫度變化的影響。微孔板在達(dá)到室溫(20-25)之前不可從密封袋中取出。
  • 直接用干凈的吸液頭從試劑瓶中吸出試劑。轉(zhuǎn)移試劑可能導(dǎo)致污染。
  • 未使用的微孔應(yīng)該立即重新密封并儲(chǔ)存于干燥環(huán)境中,否則將產(chǎn)生錯(cuò)誤結(jié)果。
  • 底物系統(tǒng):
  • 由于TMB易受金屬離子的污染,所以底物系統(tǒng)不能與金屬表面接觸。
  • 避免長(zhǎng)時(shí)間陽光直射。
  • 有些清潔劑可干擾TMB的性能。
  • TMB可能呈現(xiàn)淡藍(lán)色,這不影響底物的活性或測(cè)定結(jié)果。

 登革熱病毒捕獲法IgG抗體檢測(cè)試劑盒

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